本發明公開了基于納米抗體檢測甲萘威殘留的ELISA試劑盒及其應用,所述試劑盒包括盒體、設在盒體內的酶標板以及試劑;其中,酶標板的每個孔包被有甲萘威包被抗原,所述試劑包括抗甲萘威納米抗體、甲萘威標準溶液、酶標記的二抗、緩沖液PBS、洗滌液PBST、底物液、顯色液和反應終止液等。檢測過程中,酶標板孔壁上吸附的包被抗原和待測甲萘威相互競爭與抗體反應,通過顯色反應觀察結果。檢測已知濃度的甲萘威并繪制標準曲線,可以推算出待測甲萘威的濃度。本發明的優點是能準確靈敏地檢測水、蔬菜中甲萘威殘留,樣品的前處理過程簡單,耗時少,能同時檢測大量的樣品,樣品檢測成本遠低于傳統的儀器檢測方法。